Skip to main content
padlock icon - secure page this page is secure

Open Access Development and characterization of monoclonal antibodies against avian reovirus σC protein and their application in detection of avian reovirus isolates

Download Article:
 Download
(PDF 629.9 kb)
 
Avian reovirus (ARV) is a non-enveloped virus with a segmented double-stranded RNA genome surrounded by a double icosahedral capsid shell. ARVs are associated with viral arthritis, immunosuppression, and enteric diseases in poultry. The σC protein was involved in induction of apoptosis and neutralization antibody. In the present study, σC-His protein was expressed in Sf9 insect cells and purified by immobilized metal affinity chromatography. Eight monoclonal antibodies (mAbs) against σC-His and three mAbs against His were screened from hybridoma cells produced by fusion of splenocytes from immunized mice with NS1 myeloma cells. Among the eight mAbs against σC protein, all belonged to the IgG isotype except three for IgM. It was discovered that all anti-His mAbs were mixtures of IgG and IgM isotypes. mAbs reacted with σC-His protein in a conformation-independent manner based on dot blot and western blotting assays. The competitive binding assay indicated that all mAbs recognized the same epitope on σC protein that was conserved in different isolates. Compared with the commercial anti-ARV S1133 polyclonal antibody, mAb (D15) had universal reactivity to all serotypes or genotypes of ARVs tested. This monoclonal antibody may therefore be useful for the development of an antigen-capture enzyme-linked immunosorbent assay for rapid detection of field isolates. Développement et caractérisation des anticorps monoclonaux contre la protéine σC du réovirus aviaire et leur application dans la détection des souches d'ARV Les réovirus aviaires sont des virus non enveloppés avec un génome ARN segmenté, double brin (dsRNA), entouré d'une capside icosaédrique double. Les réovirus aviaires sont associés à l'arthrite virale, l'immunodépression et les maladies entéritiques chez les volailles. La protéine σC est impliquée dans l'induction de l'apoptose et des anticorps neutralisants. Dans cette étude, la protéine σC-His a été exprimée dans les cellules d'insecte Sf9 et a été purifiée par chromatographie d'affinité IMAC. Huit anticorps monoclonaux (MAbs) contre σC-His et trois MAbs contre HIS ont été sélectionnés à partir des cellules d'hybridome produites par la fusion de splénocytes de souris immunisées avec des cellules de myelome NS1. Parmi les huit MAbs anti protéine σC, tous appartiennent à l'isotype IgG à l'exception de trois qui sont des IgM. Il a été mis en évidence que tous les MAbs anti His étaient des mélanges d'isotypes IgG et IgM. les tests dot blot et Western blot ont montré que les MAbs réagissaient avec la protéine σC-His de façon indépendante de sa conformation. Le test de fixation compétitif a montré que tous les MAbs reconaissaient le même épitope sur la protéine σC qui était conservé sur les différentes souches. Le MAb D15 a présenté une réactivité universelle à tous les sérotypes ou génotypes de ARVs testés, comparé à l'anticorps polyclonal anti-ARV S1133 du commerce. Cet anticorps monoclonal peut, par conséquent, être utilisé pour le développement d'un test ELISA de capture antigénique pour la détection rapide des souches du terrain. Entwicklung und Charakterisierung von monoklonalen Antikörpern (Mabs) gegen das σC-Protein des aviären Reovirus (ARV) und ihre Anwendung beim Nachweis von ARV-Isolaten Das aviäre Reovirus (ARV) ist ein unbehülltes Virus mit segmentiertem, doppelsträngigem RNS (dsRNS)-Genom mit doppelter icosaedrischer Kapsidhülle. ARVs werden beim Geflügel mit viraler Arthritis, Immunsuppression und Darmerkrankungen assoziiert. Das σC-Protein ist in die Induktion von Apoptose und neutralisierenden Antikörpern involviert. In der vorliegenden Studie wurde das σC-His-Protein in Sf9-Insektenzellen exprimiert und mittels immobilisierter Metallionen - Affinitätschromatographie (IMAC) gereinigt. Aus Hybridomzellen, die durch Fusion von Milzzellen aus immunisierten Mäusen mit NS1-Myelomzellen produziert wurden, konnten acht MABs gegen das sC-His-Protein und drei MABs gegen His gewonnen werden. Bis auf drei der MABs gegen das σC-Protein, die vom IgM-Isotyp waren, gehörten alle zum IgG-Isotyp. Bei den anti-His-MABs wurde festgestellt, dass es sich um Mischungen der IgG- und IgM-Isotypen handelte. Die MABs reagierten mit dem σC-His-Protein konformationsunabhängig in Dot Blot- und Western Blotting-Tests. Der kompetitive Bindungstest zeigte, dass alle MABs das gleiche Epitop auf dem σC-Protein, das in verschiedenen Isolaten konserviert ist, erkannten. Verglichen mit dem kommerziellen, polyklonalen anti-ARV-S1133-Antikörper besitzt der MAB D15 eine universelles Reaktionsvermögen mit allen Sero- und Genotypen der gesteteten ARVs. Dieser monoklonale Antikörper kann deshalb für die Entwicklung eines Antigen-capture-ELISA zum schnellen Nachweis von Feldisolaten geeignet sein. Desarrollo y Caracterización de anticuerpos monoclonales frente a la proteína σC del reovirus aviar y su aplicación en la detección de aislamientos de ARV El reovirus aviar es un virus sin envuelta con un genoma RNA segmentado de doble cadena (dsRNA) rodeado por una doble cápside icosaédrica. Los reovirus aviares se asocian con artritis viral, inmunosupresión, y enfermedades entéricas en aves. La proteína σC está involucrada en la inducción de apoptosis y de anticuerpos neutralizantes. En este estudio, se expresó proteína σC-His en células de insecto Sf9 y se purificó mediante cromatografía de afinidad con ión metálico inmovilizado (IMAC). Se testaron ocho MAbs frente a σC-his y tres frente a His creados a partir de células de hibridoma obtenidas a través de la fusión de esplenocitos de ratones inmunizados y de células de mieloma NS1. Los ocho MAbs frente a la proteína σC pertenecían al isotipo IgG excepto tres que pertenecían al IgM. Se descubrió que todos los MAbs anti-His eran mezclas de los isotipos IgG y IgM. Los MAbs reaccionaron con la proteína σC-His de modo conformación-independiente en base a las técnicas de dot-blot y Western blot. El ensayo de unión competitiva indicó que todos los MAbs reconocían el mismo epítopo en la proteína σC, un epítopo que estaba conservado en los distintos aislamientos. En comparación con el anticuerpo policlonal anti-ARV S113 comercial, MAb (D15) mostró una reactividad universal frente a todos los serotipos o genotipos de ARVs testados. Por lo tanto, este anticuerpo monoclonal podría ser útil para el desarrollo de un ELISA de captura de antígeno para la detección rápida de aislamientos de campo.
No References for this article.
No Supplementary Data.
No Article Media
No Metrics

Document Type: Research Article

Affiliations: 1: Department of Tropical Agriculture and International Cooperation, National Pingtung University of Science and Technology, Pingtung, Taiwan 2: Department of Life Science, National Pingtung University of Science and Technology, Pingtung, Taiwan 3: Department of Veterinary Medicine, National Chung Hsing University, Taichung, Taiwan 4: Department of Life Science, Tzu-Chi University, Hualien, Taiwan 5: Graduate Institute of Biotechnology 6: Department of Veterinary Medicine

Publication date: August 1, 2006

More about this publication?
  • Access Key
  • Free content
  • Partial Free content
  • New content
  • Open access content
  • Partial Open access content
  • Subscribed content
  • Partial Subscribed content
  • Free trial content
Cookie Policy
X
Cookie Policy
Ingenta Connect website makes use of cookies so as to keep track of data that you have filled in. I am Happy with this Find out more