Contribution of epidermal growth factor receptor transactivation in angiotensin II-induced enhanced expression of G_i protein and proliferation in A10 vascular smooth muscle cells

We have recently shown that vasoactive peptides such as angiotensin II (Ang II) and endothelin-1 (ET-1) increased the expression of G_i proteins and proliferation of A10 vascular smooth muscle cells (VSMC) through MAP kinase / PI3 kinase pathways. The present study was undertaken to examine the implication of growth factor receptor activation in Ang II-induced enhanced expression of G_i proteins and proliferation of A10 VSMC and to further investigate the underlying mechanisms responsible for these increases. Cell proliferation was determined by [³H]thymidine incorporation, and the expression of G_i proteins and the phosphorylation of ERK1/2 and epidermal growth factor receptor (EGFR) was determined by Western blotting. Treatment of A10 VSMC with Ang II enhanced the expression of G_i proteins, which was attenuated by Ang II AT₁ receptor antagonist but not by AT₂ receptor antagonist. The inhibitor of EGFR also attenuated the enhanced expression of G_i proteins induced by Ang II to control levels. In addition, Ang II enhanced the phosphorylation of EGFR in A10 VSMC, and this was restored to control levels by the EGFR inhibitor and antioxidants. Furthermore, Ang II also augmented the proliferation and ERK1/2 phosphorylation of A10 VSMC, which were restored to control levels by the EGFR inhibitor. These data suggest that the Ang II-induced increase in oxidative stress transactivates EGFR, which through MAP kinase signaling may contribute to the enhanced expression of G_i proteins and thereby to the increased proliferation of A10 VSMC.

Nous avons montré récemment que les peptides vasoactifs tels que l’angiotensine II (Ang II) et l’endothéline-1 (ET-1) augmentent l’expression des protéines G_i et la prolifération des cellules du muscle lisse vasculaire (CMLV) A10, et ce, par les voies des MAP kinases / PI3 kinases. La présente étude a eu pour but d’examiner le rôle de l’activation du récepteur du facteur des croissance dans l’augmentation par Ang II de l’expression des protéines G_i et de la prolifération des CMLV A10, ainsi que d’étudier plus en détail les mécanismes à l’origine de ces augmentations. Nous avons mesuré la prolifération des cellules par incorporation de [³H]thymidine et déterminé par immunobuvardage de type western l’expression des protéines G_i ainsi que la phosphorylation des récepteurs de la protéine ERK1/2 et du facteur de croissance épidermique (R-EGF). Le traitement des CMLV A10 par Ang II a stimulé l’expression des protéines G_i, qui a été atténuée par l’antagoniste du récepteur AT₁ de l’Ang II, mais pas par l’antagoniste du récepteur AT₂. De plus, l’inhibiteur du R-EGF a aussi diminué au niveau des valeurs témoins l’augmentation par Ang II de l’expression des protéines G_i. De même, l’Ang II a stimulé la phosphorylation du R-EGF dans les CMLV A10, laquelle a été ramenée aux taux témoins par l’inhibiteur du R-EGF ainsi que par des antioxydants. L’Ang II a aussi augmenté la prolifération et la phosphorylation de la protéine ERK1/2 des CMLV A10, lesquelles ont été ramenées aux valeurs témoins par l’inhibiteur du R-EGF. Ces résultats donnent à penser que l’augmentation du stress oxydatif par l’Ang II transactive le R-EGF qui, par la voie de signalisation des MAP kinases, pourrait jouer un rôle dans l’augmentation de l’expression des protéines G_i et, par conséquent, dans l’augmentation de la prolifération des CMLV A10.