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Expression of bovine lactoferrin and lactoferrin N-lobe by recombinant baculovirus and its antimicrobial activity against Prototheca zopfii

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Lactoferrin (LF) is a multifunctional, iron-binding glycoprotein found in secretory fluids of mammals. In this study, DNA encoding bovine lactoferrin (bLF) or the N-terminal half of bLF (bLF N-lobe) was inserted into a baculovirus transfer vector, and a recombinant virus expressing bLF or bLF N-lobe was isolated. An 80-kDa bLF-related protein expressed by the recombinant baculovirus was detected by monoclonal antibodies against bLF N-lobe and the C-terminal half of bLF (bLF C-lobe). A 43-kDa bLF N-lobe-related protein expressed by the recombinant baculovirus was detected by anti-bLF N-lobe monoclonal antibody, but not by anti-bLF C-lobe monoclonal antibody. These proteins were also secreted into the supernatant of insect cell cultures. Recombinant bLF (rbLF) and bLF N-lobe (rbLF N-lobe) were affected by tunicamycin treatment, indicating that rbLF and rbLF N-lobe contain an N-linked glycosylation site. Antimicrobial activity of these recombinant proteins against Prototheca zopfii (a yeast-like fungus that causes bovine mastitis) was evaluated by measuring the optical density of the culture microplate. Prototheca zopfii was sensitive to rbLF and rbLF N-lobe, as well as native bLF. There was no difference in antimicrobial activity between rbLF N-lobe and bLF C-lobe.Key words: lactoferrin, lactoferrin N-lobe, baculovirus, antimicrobial activity, Prototheca zopfii.

La lactoferrine (LF) est une glycoprotéine multifonctionnelle qui lie le fer et se trouve dans les sécrétions des mammifères. Dans ce travail, l'ADN codant la lactoferrine bovine (LFb) ou la moitié N-terminale de la LFb (lobe N de la LFb) a été inséré dans un vecteur de transfert du baculovirus et un virus recombinant exprimant la LFb ou le lobe N de la LFb a été isolé. Une protéine de 80 kDa semblable à la LFb synthétisée par le baculovirus recombinant a été détectée par des anticorps monoclonaux dirigés contre le lobe N de la LFb et contre la moitié C-terminale de la LFb (lobe C de la LFb). Une protéine de 43 kDa semblable au lobe N de la LFb synthétisée par le baculovirus recombinant a été détectée par un anticorps monoclonal dirigé contre le lobe N de la LFb, mais non par un anticorps monoclonal dirigé contre le lobe C de la LFb. Ces protéines sont également sécrétées dans le surnageant des cultures de cellules d'insectes. La LFb recombinante (LFbr) et le lobe N recombinant de la LFb (lobe Nr de la LFb) sont affectés en présence de tunicamycine, ce qui indique que la LFbr et le lobe Nr de la LFb ont un site de N-glycosylation. L'activité antimicrobienne de ces protéines recombinantes envers Prototheca zopfii (un champignon semblable à la levure et qui entraîne une mammite chez la vache) a été évaluée en mesurant la densité optique des microplaques de culture. Prototheca zopfii est sensible à la LFbr et au lobe Nr de la LFb, ainsi qu'à la LFb native. Le lobe Nr de la LFb a la même activité antimicrobienne que le lobe C de la LFb.Mots clés : lactoferrine, lobe N de la lactoferrine, baculovirus, activité antimicrobienne, Prototheca zopfii.[Traduit par la Rédaction]
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Document Type: Research Article

Publication date: October 1, 2003

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