Skip to main content
padlock icon - secure page this page is secure

Inactivation and conformational changes of creatine kinase at low concentrations of hexafluoroisopropanol solutions

Buy Article:

$36.22 + tax (Refund Policy)

Using the methods of far-ultraviolet circular dichroism (CD) spectra, fluorescence spectra, and enzyme activity assays, the inactivation and conformational changes of creatine kinase (CK) induced by 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol (hexafluoroisopropanol (HFIP)) of different concentrations were investigated. To avoid the aggregation of CK that occurs with high HFIP, concentrations of 0%–5% HFIP were used in this study. The CD spectra showed that HFIP concentrations above 2.5% strongly induced the formation of secondary structures of CK. No marked conformational changes were observed at low concentrations of HFIP (0%–2.5%). After incubation with 0.2% HFIP for 10 min, CK lost most of its activity. The kinetic theory of the substrate reaction during irreversible inhibition of enzyme activity described previously by Tsou was applied to study the kinetics of CK inactivation during denaturation by HFIP. The inactivation rate constants for the free enzyme and the substrate–enzyme complex were determined by Tsou's method. The results suggested that low concentrations of HFIP had a high potential to induce helices of protein and that the active site of the enzyme was situated in a limited and flexible region of the enzyme molecule that was more susceptible to the denaturant than was the protein as a whole.Key words: creatine kinase, inactivation, conformation, kinetics, hexafluoroisopropanol.

À l'aide de spectres du dichroïsme circulaire dans l'ultraviolet lointain, de spectres de fluorescence et de tests d'activité enzymatique, nous avons étudié l'inactivation et les changements conformationnels de la créatine kinase (CK) causés par le 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol (hexafluoroisopropanol ou HFIP) à diverses concentrations. Pour éviter l'agréation de la CK en présence de fortes concentrations de HFIP, nous nous sommes limités, dans le cadre de l'étude, à des concentrations de HFIP variant de 0 % à 5 %. L'examen des spectres du dichroïsme circulaire a révélé que le HFIP à des concentrations supérieures à 2,5 % entraîne indéniablement la formation de la structure secondaire de la CK. Nous n'avons pas constaté de changements conformationnels significatifs dans de faibles concentrations de HFIP (soit de 0 % à 2,5 %). Après une incubation de 10 min en présence de HFIP concentré à 0,2 %, la CK n'est pratiquement plus active. La théorie de la cinétique de la réaction du substrat lors de l'inhibition irréversible de l'activité enzymatique avancée par Tsou a été appliquée à l'étude de la cinétique de l'inactivation de la CK pendant la dénaturation par le HFIP. Les constantes de vitesse d'inactivation de l'enzyme libre et du complexe substat-enzyme ont été déterminées à l'aide de la méthode proposée par Tsou. Selon les résultats, le HFIP à faible concentration entraînerait la formation de repliements en hélice de la protéine et le site actif de l'enzyme serait situé dans une région limitée et flexible de la molécule de l'enzyme plus vulnérable à l'agent dénaturant que la protéine dans son ensemble.Mots clés : créatine kinase, inactivation, conformation, cinétique, hexafluoroisopropanol.[Traduit par la Rédaction]
No Reference information available - sign in for access.
No Citation information available - sign in for access.
No Supplementary Data.
No Article Media
No Metrics

Document Type: Research Article

Publication date: October 1, 2003

More about this publication?
  • Access Key
  • Free content
  • Partial Free content
  • New content
  • Open access content
  • Partial Open access content
  • Subscribed content
  • Partial Subscribed content
  • Free trial content
Cookie Policy
X
Cookie Policy
Ingenta Connect website makes use of cookies so as to keep track of data that you have filled in. I am Happy with this Find out more