Construction and analysis of pathogenicity island deletion mutants of Erwinia amylovora

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An easy gene-knockout technique, PCR-based one-step inactivation of chromosomal genes, is widely used in Escherichia coli and related enterobacteria to construct mutants. In this study, we adapted this technique to construct genomic island and large operon deletion mutants of Erwinia amylovora, including the 33.4 kb hrp-type III secretion (T3SS) pathogenicity island (PAI1) and the 15.8 kb amylovoran biosynthesis (AMS) operon. Deletion of 2 novel T3SS pathogenicity islands (PAI2 and PAI3) and an operon encoding a type II secretion system (T2SS) demonstrated that these determinants are not involved in virulence in plants. Co-inoculation experiments demonstrated that the hrp-T3SS and AMS deletion mutants could complement each other. These results further confirmed that the one-step inactivation technique can be used to generate large deletions in E. amylovora.

Une technique simple d’ablation génique en une étape par PCR pour inactiver des gènes chromosomiques est largement utilisée chez Escherichia coli et autres bactéries entériques reliées afin de construire des mutants. Dans cette étude, nous avons adapté cette technique pour construire des mutants de délétion d’îlots génomiques et de grands opérons chez Erwinia amylovora, dont l’îlot de pathogénie hrp du système de sécrétion de type III (T3SS) de 33.4 kb (PAI1) et l’opéron de biosynthèse de l’amylovoran de 15.8 kb (AMS). La délétion de deux nouveaux îlots de pathogénie T3SS (PAI2 et PAI3) et de l’opéron codant le système de sécrétion de type II (T2SS) a démontré que ces déterminants n’étaient pas impliqués dans la virulence chez les végétaux. Des expériences de co-inoculation ont démontré que les mutants de délétion du hrp-T3SS et de l’AMS pouvaient se complémenter réciproquement. Ces résultats confirment davantage que cette technique d’inactivation en une étape peut être utilisée pour générer de grandes délétions chez E. amylovora.

Document Type: Research Article

Publication date: April 1, 2009

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  • Published since 1954, this monthly journal contains new research in the field of microbiology including applied microbiology and biotechnology; microbial structure and function; fungi and other eucaryotic protists; infection and immunity; microbial ecology; physiology, metabolism and enzymology; and virology, genetics, and molecular biology. It also publishes review articles and notes on an occasional basis, contributed by recognized scientists worldwide.
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