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Development of 2 types of competitive enzyme-linked immunosorbent assay for detecting antibodies to the rinderpest virus using a monoclonal antibody for a specific region of the hemagglutinin protein

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Abstract:

A competitive enzyme-linked immunosorbent assay (C-ELISA) has been developed and standardized for the detection of antibodies to the rinderpest virus (RPV) in sera from cattle, sheep, and goats. The test is specific for rinderpest because it does not detect antibodies to peste-des-petits-ruminants virus (PPRV). The test depends on the ability of the monoclonal antibody (MAb) directed against the hemagglutinin (H) protein of RPV to compete with the binding of RPV antibodies in the positive serum to the H protein of this virus. This MAb recognized a region from amino acids 575 to 583 on the H protein of RPV that is unique to the RPV H protein and is not present on the hemagglutinin-neuraminidase protein of PPRV. Another C-ELISA (peptide C-ELISA) was set up using this specific region as an antigen. A threshold value of 64.4% inhibition was established for the RPV C-ELISA, with 90 known RPV-negative and 30 RPV-positive serum samples. Using common serum samples, a cutoff value of 43.0% inhibition for the peptide C-ELISA was established. Based on statistical analysis, the overall sensitivity and specificity of the RPV C-ELISA, relative to those of a commercial kit, were found to be 90.00% and 103.33%, respectively. However, the sensitivity and specificity of the peptide C-ELISA were found to be 180.00% and 73.33%, respectively. Although a common MAb in 2new C-ELISA systems was used, variation in their percent inhibition, due to the use of different antigens, was observed. Taking into consideration the difference in percent inhibition of the 2 described assays and the commercial kit (50%), it was found that the RPV C-ELISA and the peptide C-ELISA are more specific and sensitive tools than the commercial kit for assessing herd immune status and for epidemiologic surveillance.

Un ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) compétitif (C-ELISA) a été développé et standardisé pour détecter la présence d’anticorps dirigés contre le morbillivirus bovin (MVB) du sérum de bovins, de moutons et de chèvres. Le test est spécifique au morbillivirus bovin car il ne détecte pas la présence d’anticorps dirigés contre le virus de la peste-des-petits-ruminants (VPPR). Le test repose sur la capacité de l’anticorps monoclonal (MAb) dirigé contre l’hémagglutinine (H) du MVB à entrer en compétition avec les anticorps anti-MVB trouvés dans les sérums positifs lors d’essais de liaison à l’hémagglutinine. Cet anticorps reconnaissait une région comprenant les acides aminés 575 à 583 de l’hémagglutinine du MVB, unique à cette protéine et absente de l’hémagglutinine-neuraminidase du VPPR. Un autre C-ELISA (C-ELISA peptide) a été conçu à partir de cette région antigénique spécifique. Une valeur limite d’inhibition de 64,4% a été établie pour le C-ELISA du MVB, avec 90 échantillons de sérums négatifs et 30 échantillons positifs connus. En utilisant des échantillons de sérums communs, une valeur limite de 43,0 % d’inhibition a été fixée pour le C-ELISA peptide. Selon une analyse statistique, la sensibilité et la spécificité globales du C-ELISA MVB par rapport à celles d’une trousse commerciale étaient de 90,00% et 103,33 % respectivement. Cependant, la sensibilité et la spécificité du C-ELISA peptide étaient de 180,00% et 73,33 % respectivement. Quoiqu’un anticorps commun aux 2 systèmes de C-ELISA ait été utilisé, une variation du pourcentage d’inhibition causée par l’utilisation d’antigènes différents a été observée. En tenant compte de la différence du pourcentage d’inhibition des 2 systèmes décrits ici et celui de la trousse commerciale (50 %), le C-ELISA MVB et le C-ELISA peptide sont plus spécifiques et plus sensibles que la trousse commerciale pour évaluer le statut immunitaire d’un troupeau et pour la surveillance épidémiologique.

Document Type: Research Article

Publication date: June 1, 2007

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  • Published since 1954, this monthly journal contains new research in the field of microbiology including applied microbiology and biotechnology; microbial structure and function; fungi and other eucaryotic protists; infection and immunity; microbial ecology; physiology, metabolism and enzymology; and virology, genetics, and molecular biology. It also publishes review articles and notes on an occasional basis, contributed by recognized scientists worldwide.
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