Culture of Helicobacter pylori from stool samples in children

Authors: Valizadeh, Nargess; Najafi, Mehri; Ehsani, Azadeh; Khani, Afsaneh; Landarani, Zahra; Falahi, Zahra; Falsafi, Tahereh

Source: Canadian Journal of Microbiology, Volume 53, Number 3, March 2007 , pp. 411-416(6)

Publisher: NRC Research Press

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Abstract:

We evaluated two protocols for isolation of Helicobacter pylori in stool from biopsied and nonbiopsied children. Twenty-three child patients whose presumptive positivity or negativity was diagnosed by endoscopy and a rapid urease test at site were used to compare biopsy-based tests with stool-based tests (H. pylori stool antigen test and stool culture). Their gastric activity and bacterial density were graded by the updated Sydney system. Biopsy and stool specimens were cultured on Campy-blood and Belo horizonte agar plates after enrichment in selective Campy-Thio medium. To compare two stool culture protocols, stools from 20 nonbiopsied children were tested by the HpSA test and cultured either as above or after treatment with cholestyramine. Grown colonies were screened by Gram staining, slide agglutination using anti-H. pylori monoclonal IgG; positive isolates were tested by biochemical tests and polymerase chain reaction for H. pylori-specific ureA gene. Coccoid H. pylori was isolated in stool samples from the biopsied patients whose bacterial density was two to four in histology. Their oxidase was slightly positive but became positive after two subcultures, while additional biochemical tests confirmed the isolation of H. pylori. Similar coccoid but oxidase positive H. pylori was isolated from three nonbiopsied children with the protocol of cholestyramine treatment only. The density of bacteria in the stomach may influence the recovery of H. pylori from stool; inactivation of bile with cholestyramine improves the yield in culture and favors isolation of an enhanced metabolic form of bacteria.

Nous avons évalué deux protocoles d’isolement de Helicobacter pylori à partir des selles d’enfants ayant subi ou non une biopsie. Vingt-deux enfants, dont la positivité ou la négativité présumée a été diagnostiquée par endoscopie et par un test rapide à l’uréase, ont été recrutés pour comparer les tests basés sur la biopsie et les tests basés sur les selles (test de détection de l’antigène fécal de H. pylori HpSA et culture des selles). La gradation de leur activité gastrique et de la densité bactérienne a été réalisée par le système de Sydney révisé. Les spécimens de biopsies et de selles ont été cultivés sur des plaques d’agar Campy-blood et Belo horizonte après une période d’enrichissement sur milieu sélectif Campy-thio. Afin de comparer deux protocoles de culture des selles, les selles de 20 enfants n’ayant pas subi de biopsie ont été testées par la détection du HpSA et cultivées comme décrit précédemment, ou après traitement à la cholestyramine. Les colonies obtenues ont été criblées par coloration Gram, l’agglutination sur lame à l’aide d’un IgG monoclonal anti H. pylori; les isolats positifs ont été soumis à des tests biochimiques et à une réaction en chaîne de la polymérase visant à détecter le gène ureA spécifique de H. pylori. Helicobacter pylori sous forme coccoïde a été isolé des selles de patients ayant subi une biopsie dont la densité bactérienne était de deux á quatre à l’histologie. L’activité oxydase était légèrement détectable, mais est devenue positive après deux sous-cultures, alors que des tests biochimiques additionnels ont confirmé l’isolement de H. pylori. Des formes coccoïdes similaires mais négatives à l’oxydase ont été isolées de trois enfants n’ayant pas subi de biopsies, lors du protocole utilisant la cholestyramine seulement. La densité bactérienne de l’estomac peut influencer la récupération de H. pylori dans les selles; l’inactivation de la bile avec la cholestyramine améliore le rendement de la culture et favorise l’isolement de formes métaboliquement plus actives de la bactérie.

Document Type: Research Article

Publication date: March 1, 2007

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