Purification and characterization of an extracellular protease produced by psychrotolerant Clostridium sp. LP3 from lake sediment of Leh, India

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An anaerobic, proteolytic bacterium isolated from lake sediments of Leh, India, was characterized with respect to morphology, biochemical characteristics, and 16S rRNA sequence and was identified as Clostridium species, with closest similarity to Clostridium subterminale. Isolate LP3 was psychrophilic, forming maximum cell mass between 10 and 20 °C, and produced extracellular protease. Growth was observed in the pH range of 7.0–8.5, with optimum at pH 7.5. Protease was purified 62.4-fold with a total yield of 17.5%. The effects of temperature, pH, and salt concentration on enzyme activity were studied. Protease was found to be a serine-type metallo-enzyme, active in a broad range of pHs. It was thermolabile and resistant to sodium dodecyl sulfate. Enzyme kinetics showed a tendency to increase Km with an increase in temperature for casein substrate.Key words: Clostridium sp., psychrotolerant, protease, anaerobe.

Une bactérie anaérobique et protéolytique isolée de sédiments d'un lac à Leh, en Inde, a été caractérisée en fonction de sa morphologie, de ses caractéristiques biochimiques et de la séquence de l'ARNr 16S, et s'est révélée appartenir à l'espèce Clostridium, la similarité la plus proche étant avec Clostridium subterminale. L'isolat LP3 était psychrophile, formant une masse cellulaire maximale entre 10 et 20 °C et produisait une protéase extracellulaire. La croissance a été observée à un pH de 7,0 à 8,5, le pH optimum étant de 7,5. La protéase a été purifiée 62,4 fois avec un rendement total de 17,5 %. Les effets de la température, du pH et de la concentration en sels sur l'activité enzymatique ont été étudiés. La protéase s'est avérée être une métallo-enzyme à sérine, active dans une vaste échelle de pH. Elle était thermolabile et résistante au dodécylsulfate de sodium. La cinétique enzymatique a montré que le Km avait tendance à augmenter en fonction de la température lorsque la caséine était utilisée comme substrat.Mots clés : Clostridium sp., psychrotolérant, protéase, anaérobie.[Traduit par la Rédaction]

Document Type: Research Article

Publication date: December 1, 2006

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