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Characterization of cytoplasmic fibril structures found in gliding cells of Saprospira sp.

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Abstract:

The cytoplasmic fibril structures of Saprospira sp. strain SS98-5 grown on a low-nutrient agar medium were purified from cell lysates treated with Triton X-100 and were observed by electron microscopy to be about 7 nm in width and 200–300 nm in length. SDS–PAGE of the fibril structures exhibited a single protein band with a molecular mass of 61 kDa. A Saprospira cytoplasmic fibril protein (SCFP), which is a subunit of the fibril structures, was digested with trypsin to oligopeptides and analyzed for amino acid sequences. A partial nucleotide sequence of the SCFP gene was determined after PCR using primers designated from the amino acid sequences of the oligopeptides. SCFP gene including DNA fragments were detected by Southern hybridization using the PCR product for an SCFP gene as a probe and were cloned to determine whole nucleotide sequences. The SCFP gene indicated relatively higher similarity to conserved hypothetical phage tail sheath proteins. A Western immunoblotting analysis showed that SCFP was significantly expressed in gliding cells as compared with nongliding cells. The above findings with the previously reported results suggest that the cytoplasmic fibril structures are possibly related to the gliding motility of Saprospira sp. strain SS98-5.Key words: Saprospira, gliding motility, Saprospira cytoplasmic fibril protein (SCFP).

Les structures cytoplasmiques fibrillaires de la souche SS98-5 de Saprospira sp. cultivée dans un milieu gélosé à basse teneur en nutriments ont été purifiées de lysats cellulaires traités au Triton X-100 et leur taille telle que mesurée par microscopie électronique était d'environ 7 nm de largeur et de 200–300 nm de longueur. Une seule bande de protéine d'un masse moléculaire de 61 kDa fut révélée par un SDS–PAGE des structures fibrillaires. La protéine cytoplasmique fibrillaire de Saprospira (SCFP), qui est une sous-unité des structures fibrillaires, fut digérée avec de la trypsine pour produire des oligopeptides et analysée par séquençage des acides aminés. Une séquence de nucléotides partielle du gène de la SCFP fut déterminée par PCR en utilisant des amorces élaborées à partir des séquences en acides aminés des oligopeptides. Des fragments d'ADN renfermant le gène de la SCFP furent détectés par hybridation de type Southern en utilisant les produits de PCR de gènes de la SCFP comme sondes et furent clonés afin de déterminer la séquence nucléotidique complète. Le gène de la SCFP a démontré une similitude relativement élevée à des protéines hypothétiques conservées d'enveloppes de queues phages. Une analyse par immunobuvardage de type Western a démontré que la SCFP était significativement exprimée chez les cellules glissantes comparativement aux cellules non glissantes. Les découvertes présentées ici de concert avec des résultats mentionnés précédemment indiquent que les struc tures cytoplasmiques fibrillaires sont probablement liées à la mobilité par glissement de la souche SS98-5 de Saprospira sp.Mots clés : Saprospira, mobilité par glissement, protéine cytoplasme fibrillaire de Saprospira (SCFP).[Traduit par la Rédaction]

Document Type: Research Article

Publication date: September 1, 2005

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  • Published since 1954, this monthly journal contains new research in the field of microbiology including applied microbiology and biotechnology; microbial structure and function; fungi and other eucaryotic protists; infection and immunity; microbial ecology; physiology, metabolism and enzymology; and virology, genetics, and molecular biology. It also publishes review articles and notes on an occasional basis, contributed by recognized scientists worldwide.
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nrc/cjm/2005/00000051/00000010/art00007
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