HasF, a TolC-homolog of Serratia marcescens, is involved in energy-dependent efflux

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Abstract:

A tolC-like gene (hasF) was identified upon scanning the incomplete database of the S. marcescens genome. This gene was amplified using PCR and cloned in the pUC18 vector to yield pUCHF. Sequencing of the S. marcescens tolC-like hasF gene and subsequent amino acid sequence prediction revealed approximately 80% amino acid homology with the Escherichia coli TolC. A tolC-deficient strain of E. coli (BL923) containing pUCHF/hasF was analyzed for susceptibility to fluoroquinolones (ciprofloxacin, norfloxacin, and ofloxacin), chloramphenicol, sodium dodecyl sulfate (SDS), and ethidium bromide. Antibiotic susceptibility assays of the E. coli tolC-deficient mutant BL923 demonstrated a 64-fold increase in resistance to SDS and ethidium bromide upon introduction of the S. marcescens tolC-like hasF gene. No change was observed for susceptibility to fluoroquinolones and chloramphenicol. Ethidium bromide accumulation assays performed using E. coli BL923:pUCHF established the role of the S. marcescens hasF gene product in proton gradient-dependent efflux.Key words: HasF, TolC, efflux, S. marcescens.

Un gène semblable à tolC (hasF) a été identifié suite à l'interrogation de la base de données incomplète du génome de S. marcescens. Ce gène a été amplifié par PCR et cloné dans le vecteur pUC18 pour obtenir pUCHF. Le séquençage du gène hasF semblable à tolC de S. marcescens et la séquence en acides aminés prédite par la suite a révélé environ 80 % d'homologie en acides aminés avec le TolC de E. coli. Une souche de E. coli déficiente en tolC (BL923) et contenant pUCHF/hasF a été analysée pour sa susceptibilité aux fluoroquinolones (ciprofloxacine, norfloxacine et ofloxacine), au chloramphénicol, au SDS et au bromure d'éthyde. Les tests de susceptibilité aux antibiotiques du mutant BL923 de E. coli déficient en tolC ont démontré une augmentation d'un facteur de 64 de la résistance au SDS et au bromure d'éthyde lors de l'introduction du gène hasF semblable à tolC de S. marcescens. Aucun changement dans la susceptibilité aux fluoroquinolones et au chloramphénicol n'a été observé. Les tests d'accumulation de bromure d'éthyde effectués avec E. coli BL923:pUCHF ont permis d'établir que le produit du gène hasF de S. marcescens jouait un rôle dans l'efflux dépendant du gradient de protons.Mots clés : HasF, TolC, efflux, S. marcescens.[Traduit par la Rédaction]

Document Type: Research Article

Publication date: June 1, 2005

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