Pandemic strains of O3:K6 Vibrio parahaemolyticus in the aquatic environment of Bangladesh

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A total of 1500 environmental strains of Vibrio parahaemolyticus, isolated from the aquatic environment of Bangladesh, were screened for the presence of a major V. parahaemolyticus virulence factor, the thermostable direct haemolysin (tdh) gene, by the colony blot hybridization method using a digoxigenin-labeled tdh gene probe. Of 1500 strains, 5 carried the tdh sequence, which was further confirmed by PCR using primers specific for the tdh gene. Examination by PCR confirmed that the 5 strains were V. parahamolyticus and lacked the thermostable direct haemolysin-related haemolysin (trh) gene, the alternative major virulence gene known to be absent in pandemic strains. All 5 strains gave positive Kanagawa phenomenon reaction with characteristic -haemolysis on Wagatsuma agar medium. Southern blot analysis of the HindIII-digested chromosomal DNA demonstrated, in all 5 strains, the presence of 2 tdh genes common to strains positive for Kanagawa phenomenon. However, the 5 strains were found to belong to 3 different serotypes (O3:K29, O4:K37, and O3:K6). The 2 with pandemic serotype O3:K6 gave positive results in group-specific PCR and ORF8 PCR assays, characteristics unique to the pandemic clone. Clonal variations among the 5 isolates were analyzed by comparing RAPD and ribotyping patterns. Results showed different patterns for the 3 serotypes, but the pattern was identical among the O3:K6 strains. This is the first report on the isolation of pandemic O3:K6 strains of V. parahaemolyticus from the aquatic environment of Bangladesh.Key words: pandemic strains, Vibrio parahaemolyticus, aquatic environment.

Un total de 1500 souches environnementales de Vibrio parahaemolyticus, isolées d'un environnement aquatique du Bangladesh, ont été criblées pour la présence d'un facteur majeur de virulence de V. parahaemolyticus, le gène de l'hémolysine thermostable directe (tdh), par une méthode d'hybridation des colonies employant une sonde tdh marquée à la digoxygénine. Parmi les 1500 souches, cinq souches renfermaient la séquence tdh, ce qui a par la suite été confirmé par réaction de la polymérase en chaîne (PCR) à l'aide d'amorces spécifiques au gène tdh. Une analyse par PCR a confirmé que les cinq souches étaient bel et bien V. parahaemolyticus et étaient dépourvues de l'hémolysine apparentée à l'hémolysine thermostable directe (trh), un gène de virulence auxiliaire dont on sait qu'il est absent chez les souches pandémiques. Les cinq souches ont démontré une réaction positive au phénomène de Kanagawa avec une -hémolyse caractéristique sur milieu Wagatsuma agar. Une analyse par hybridation de type Southern d'ADN chromosomique digéré avec HindIII a démontré la présence de deux gènes tdh communs aux cinq souches positives pour le phénomène de Kanagawa. Toutefois, nous avons constaté que les cinq souches appartenaient à trois sérotypes différents (O3:K29, O4:K37 et O3:K6). Parmi ces cinq souches, deux étaient du sérotype pandémique O3:K6 et donnaient un signal positif suite à des analyses par PCR spécifique au groupe (SG) et de l'ORF8, des attributs uniques au clone pandémique. Des variations clonales parmi les cinq isolats ont été analysées en comparant les profils de RAPD et de ribotypage. Les résultats ont révélé différents profils chez les trois sérotypes mais le profil était identique parmi les souches O3:K6. Nous faisons ici état pour la première fois de l'isolation de souches pandémiques O3:K6 de V. parahaemolyticus à partir de l'environnement aquatique du Bangladesh.Mots clés : souches pandémiques, Vibrio parahaemolyticus, environnement aquatique.[Traduit par la Rédaction]

Document Type: Research Article

Publication date: October 1, 2004

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