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Preservation of in vitro cultures of the mite pathogenic fungus Neozygites tanajoae

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Neozygites tanajoae has recently been described as a new fungal pathogen distinct from Neozygites floridana. This pathogen is currently being used as a classical biological control agent against the cassava green mite, Mononychellus tanajoa (Bondar), in Africa. Neozygites tanajoae is a particularly fastidious species, and in vitro cultures of isolates from Brazil and Africa have only recently been established. In this study, the efficacy of several cryoprotectants at different exposure times, cooling rates, and warming rates for protecting hyphal bodies of N. tanajoae during cryopreservation was investigated. A protocol for preservation of cultures of N. tanajoae at ultra-low temperatures of –80 °C or –196 °C, using 1% trehalose + 2% dimethyl sulfoxide as cryoprotective agents, is described in detail. In this study, we demonstrate that N. tanajoae differs remarkably from N. floridana (isolates ARSEF 662 and ARSEF 5376) in the ability to withstand the stress of cold temperature (4 °C) and cryopreservation. In vitro cultures of the 2 N. floridana isolates remained viable at 4 °C for up to 47 d; however, cultures of N. tanajoae did not survive this temperature for 4 d. Cryopreservation methods successful for N. tanajoae isolates are not suitable for N. floridana and are unusual in comparison to those for many fungi.Key words: Neozygites floridana, Mononychellus tanajoa, cryopreservation, fungal storage, Entomophthorales.

Neozygites tanajoae est un nouveau pathogène fongique récemment décrit qui est distinct de N. floridana. Ce pathogène est présentement utilisé en tant qu'agent de lutte biologique contre la mite verte du manioc, Mononychellus tanajoa (Bondar), en Afrique. Neozygites tanajoae est une espèce particulièrement fastidieuse, et des cultures in vitro d'isolats du Brésil et de l'Afrique n'ont pu être établies que tout récemment. Dans cette étude, nous avons examiné l'efficacité de plusieurs cryoprotectants à différents temps d'exposition et vitesses de refroidissement et de réchauffement, afin de protéger les corps hyphaux de N. tanajoae au cours de la cryopréservation. Nous détaillons un protocole de préservation des cultures de N. tanajoae à des températures ultra-basses de –80 °C ou –196 °C, en utilisant 1 % de tréhalose + 2 % de diméthyl sulfoxyde en tant qu'agents cryoprotectants. Dans cette étude, nous démontrons que N. tanajoae diffère remarquablement de N. floridana (isolats ARSEF 662 et ARSEF 5376) dans sa capacité à résister au stress des températures froides (4 °C) et à la cryopréservation. Des cultures in vitro de deux isolats de N. floridana sont demeurées viables à 4 °C jusqu'à 47 jours; toutefois, des cultures de N. tanajoae n'ont pu survivre à ces températures pendant 4 jours. Les méthodes des cryopréservation qui ont porté fruit pour les isolats de N. tanajoae ne sont pas appropriées pour N. floridana et sont peu communes comparativement à celles appliquées à plusieurs autres champignons.Mots clés : Neozygites floridana, Mononychellus tanajoae, cryopréservation, conservation des champignons microscopiques, Entomophthorales.[Traduit par la Rédaction]

Document Type: Research Article

Publication date: August 1, 2004

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  • Published since 1954, this monthly journal contains new research in the field of microbiology including applied microbiology and biotechnology; microbial structure and function; fungi and other eucaryotic protists; infection and immunity; microbial ecology; physiology, metabolism and enzymology; and virology, genetics, and molecular biology. It also publishes review articles and notes on an occasional basis, contributed by recognized scientists worldwide.
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