Characterization and regulation of the -glutamyl transpeptidase gene from the fission yeast Schizosaccharomyces pombe

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Abstract:

The structural gene for the putative -glutamyl transpeptidase (GGT) was isolated from the chromosomal DNA of the fission yeast Schizosaccharomyces pombe. The determined sequence contained 3324 bp and encoded the predicted 630 amino acid sequence of GGT, which resembles counterparts in Homo sapiens, Rattus norvegicus, Saccharomyces cerevisiae, and Escherichia coli. The S. pombe cells harboring the cloned GGT gene showed about twofold higher GGT activity in the exponential phase than the cells harboring the vector only, indicating that the cloned GGT gene was functional. To monitor the expression of the S. pombe GGT gene, we fused the fragment 1085 bp upstream of the cloned GGT gene into the promoterless -galactosidase gene of the shuttle vector YEp367R to generate the fusion plasmid pGT98. The synthesis of -galactosidase from the fusion plasmid in S. pombe cells was enhanced by treatments with NO-generating sodium nitroprusside (SN), L-buthionine-(S,R)-sulfoximine (BSO), and glycerol. The GGT mRNA level in the S. pombe cells was increased by SN and BSO. Involvement of Pap1 in the induction of the GGT gene by SN and BSO was observed.Key words: fission yeast, genomic DNA, -glutamyl transpeptidase, Pap1, regulation, Schizosaccharomyces pombe.

Le gène structural de la -glutamyl transpeptidase (GGT) a été isolé à partir de l'ADN chromosomique de la levure scissipare Schizosaccharomyces pombe. La séquence déterminée était d'une longueur de 3324 pb, et codait la séquence en acides aminés prédite de la GGT, qui est analogue à celles retrouvées chez Homo sapiens, Rattus norvegicus, Saccharomyces cerevisiae et Escherichia coli. Les cellules de S. pombe qui renfermaient le gène cloné de la GGT ont démontré une activité GGT environ deux fois plus élevée lors de la phase exponentielle que les cellules porteuses du vecteur seul, ce qui indique que le gène cloné de la GGT est fonctionnel. Afin de faire le suivi de l'expression du gène de la GGT de S. pombe, le fragment de 1085 pb en aval du gène cloné de la GGT a été fusionné à une -galactosidase sans promoteur dans le vecteur navette YEp367R afin de produire le plasmide de fusion pGT98. La synthèse de la -galactosidase à partir du plasmide de fusion dans les cellules de S. pombe fut stimulée par des traitements avec du nitroprusside de sodium (NS) - un générateur de NO, du L-buthionine-(S,R)-sulfoximine (BSO) et du glycérol. Les niveaux d'ARNm de la GGT dans les cellules de S. pombe ont été augmentés par le NS et le BSO. Nous avons trouvé que Pap1 était impliqué dans l'induction du gène de la GGT par le NS et le BSO.Mots clés : levures scissipares, ADN génomque, -glutamyl transpeptidase, Pap1, régulation, Schizosaccharomyces pombe.[Traduit par la Rédaction]

Document Type: Research Article

Publication date: January 1, 2004

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