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A metalloproteinase extracellularly released by Crithidia deanei

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Actively motile cells from a cured strain of Crithidia deanei released proteins in phosphate buffer (pH 7.4). The molecular mass of the released polypeptides, which included some proteinases, ranged from 19 to 116 kDa. One of the major protein bands was purified to homogeneity by a combination of anion-exchange and gel filtration chromatographs. The apparent molecular mass of this protein was estimated to be 62 kDa by sodium dodecyl sulfate – polyacrylamide gel electrophoresis (SDS–PAGE). The incorporation of gelatin into SDS–PAGE showed that the purified protein presented proteolytic activity in a position corresponding to a molecular mass of 60 kDa. The enzyme was optimally active at 37 °C and pH 6.0 and showed 25% of residual activity at 28 °C for 30 min. The proteinase was inhibited by 1,10-phenanthroline and EDTA, showing that it belonged to the metalloproteinase class. A polyclonal antibody to the leishmanial gp63 reacted strongly with the released C. deanei protease. After Triton X-114 extraction, an enzyme similar to the purified metalloproteinase was detected in aqueous and detergent-rich phases. The detection of an extracellular metalloproteinase produced by C. deanei and some other Crithidia species suggests a potential role of this released enzyme in substrate degradation that may be relevant to the survival of trypanosomatids in the host.Key words: endosymbiont, trypanosomatid, extracellular, proteinase.

Des cellules mobiles actives d'une souche de Crithidia deanei ayant subi une cure libèrent des protéines dans une tampon phosphate (pH 7,4). Les masses moléculaires des polypeptides libérés, qui comptent des protéinases, se situent entre 19 et 116 kDa. Une des bandes protéiques majeure a été purifiée jusqu'à l'homogénéité par une combinaison de chromatographies à échange d'anions et à filtration sur gel. La masse moléculaire apparente de cette protéine fut estimée à 62 kDa par électrophorèse sur gel de polyacrylamide avec dodécyl sulfate de sodium (SDS–PAGE). L'incorporation de gélatine au SDS–PAGE a démontré que la protéine purifiée possédait une activité protéolytique à une position correspondant à une masse moléculaire de 60 kDa. L'enzyme avait une activité optimale à 37 °C et à pH 6,0, et a manifesté une activité résiduelle de 25 % à 28 °C pendant 30 min. La protéinase a été inhibée par la 1,10-phénanthroline et l'EDTA, ce qui démontre qu'elle appartient à la classe des métalloprotéinases. Un anticorps polyclonal contre la gp63 de Leishmania a réagit fortement contre la protéase émise par C. deanei. À la suite d'une extraction au Triton X-114, une enzyme semblable à la métalloprotéinase a été détectée à la fois dans la phase aqueuse et dans la phase riche en détergent. La découverte d'une métalloprotéinase extracellulaire produite par C. deanei et certaines autres espèces de Crithidia suggère que cette enzyme libérée jouerait un rôle potentiel dans la dégradation de substrats, ce qui pourrait être important pour la survie des trypanosomatides dans l'hôte.Mots clés : endosymbionte, trypanosomatides, extracellulaire, protéinase.[Traduit par la Rédaction]

Document Type: Research Article

Publication date: October 1, 2003

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  • Published since 1954, this monthly journal contains new research in the field of microbiology including applied microbiology and biotechnology; microbial structure and function; fungi and other eucaryotic protists; infection and immunity; microbial ecology; physiology, metabolism and enzymology; and virology, genetics, and molecular biology. It also publishes review articles and notes on an occasional basis, contributed by recognized scientists worldwide.
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