Properties of a hydrophobin isolated from the mycoparasitic fungus Verticillium fungicola

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Verticillium fungicola, isolated from Agaricus bisporus (commercial mushroom), produced significant extracellular hydrophobin when grown for 7 days in a static liquid culture of synthetic minimal medium. The hydrophobin was purified by precipitation with ammonium sulphate (80% saturation), Sephadex G-100 gel filtration, and hydroxyapatite column chromatography. The purified protein yielded a single band in polyacrylamide gel electrophoresis under native conditions, with an apparent molecular mass of 70 ± 4 kDa, and also another single band in SDS–PAGE, with a molecular mass of 7 ± 3 kDa. Molecular mass determined with matrix-assisted laser desorption ionization–mass spectrometry (MALDI–MS) resulted in 7563.9 m/z. The same protein was extracted from the V. fungicola mycelium. Analysis of the amino acid composition revealed the presence of about 50% hydrophobic residues, detecting at least six cysteines, evaluated as cystines, and no free sulfhydryl groups. The protein did not show any glycosylation. On the basis of similarities in hydropathy patterns and solubility characteristics, V. fungicola hydrophobin can be included as a new member of Class II hydrophobins.Key words: Verticillium fungicola, Agaricus bisporus, hydrophobin, mycoparasitism.

Le microorganisme pathogène Verticillium fungicola isolé à partir de corps fructifères d'Agaricus bisporus (champignon commercial) et cultivé statiquement pendant une durée de 7 jours dans un bouillon de culture synthétique minimum sécrète dans ce même milieu une hydrophobine en assez grande quantité. Cette protéine a été purifiée par précipitation avec du sulfate d'ammonium (à 80 % de saturation), suivie par filtration sur gel de Sephadex G-100 et finalement par chromatographie sur colonne d'hydroxyapatite. Par électrophorèse sur gel de polyacrylamide dans des conditions natives, la protéine purifiée montre une bande unique avec un poids moléculaire apparent de 70 ± 4 kDa, alors qu'on détecte une unique bande de 7 ± 3 kDa dans des conditions dénaturantes (SDS–PAGE). Le poids moléculaire déterminé par spectrométrie de masse à désorption-ionisation laser assistée par matrice (MALDI–MS) donne une valeur de 7563,9 m/z. Cette même protéine a pu être extraite du mycélium de V. fungicola. La composition quantitative en acides aminés révèle la présence d'environ 50 % de résidus hydrophobes, au moins 6 résidus de cystéines, évalués comme cystines, aucun groupe sulfhydryl libre n'étant détecté. D'autre part, aucune glycosylation de la protéine n'a pu être décelée. L'hydrophobine de V. fungicola, vu ses caractéristiques d'hydropathie ainsi que celles de solubilité, peut être considérée comme appartenant au groupe II des hydrophobines.Mots clés : Verticillium fungicola, Agaricus bisporus, hydrophobine, mycoparasitisme.

Keywords: Agaricus bisporus; Verticillium fungicola; hydrophobin; hydrophobine; mycoparasitism; mycoparasitisme

Document Type: Research Article

Publication date: November 1, 2002

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