A procedure for quantifying adhesion of conidia of Botrytis cinerea to the skin of apple fruit

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Abstract:

Ultrasonication was evaluated as a nonchemical means to quantitatively remove conidia of Botrytis cinerea from the skin of Golden Delicious apple (Malus domestica Borkh.) fruit. A probe immersed in a suspension of conidia and generating 20 kHz at 150 W for 30- or 60-s pulses destroyed 13.3% or 29% of conidia, respectively. Destruction at 150 W for 10 s or at 30–120 W for up to 60 s was <2%. The procedure for quantifying adhesion of conidia to the skin of fruit consisted of pipetting a 50-µL water droplet containing 5 × 104 conidia onto the skinside of a slice of fruit, incubating the slices inside sealed 500 cm3 glass jars, excising a 1 cm diameter piece of skin bearing the droplet, and sonicating the skin in 8 mL of ice-cold water at 150 W for 10 s. The skin was removed, the suspension was centrifuged at 1250 × g for 15 min, and the supernatant was reduced to 1 mL by vacuum suction using a pipet. Conidia were stained with crystal violet and counted in a hemacytometer. Adhesion of conidia to skin was 3.0%, 14.6%, 20.8%, 39.4%, 57.6%, and 73.1% after 0, 2, 4, 8, 12, and 24 h incubation, respectively. Sonication was more effective than two other procedures for recovery of conidia. Conidia on the skin of fruit exposed to 4 µL of butyl acetate in the headspace of glass jars for 4 h at 23°C increased the adhesion of conidia 107% above that for unexposed conidia. Sonication with a programmable power- and time-controlled probe was a simple, rapid, safe, and effective method for quantifying adhesion of B. cinerea conidia to the skin of apple fruit.Key words: ultrasonication, Botrytis cinerea, spore adhesion, butyl acetate, fungal ecology, phyllosphere.

Nous avons évalué l'emploi de l'ultrasonification comme moyen non chimique d'enlever de façon quantitative des conidies de Botrytis cinerea de la peau de la pomme Golden Delicious (Malus domestica Borkh.). Une sonde immergée dans une suspension de conidies et émettant des pulsations de 30 ou 60 s à 20 kHz et 150 W a détruit, respectivement 13,3 % ou 29 % des conidies. La destruction à 150 W pendant 10 s ou à 30–120 W pendant jusqu'à 60 s était de < 2 %. La procédure de quantification de l'adhérence des conidies à la peau de fruit consistait à pipetter une gouttelette d'eau de 50 µL renfermant 5 × 104 conidies sur la peau d'une tranche de fruit, puis à incuber les tranches dans des récipients en verre scellés de 500 cm3, ensuite à exciser un morceau de peau de 1 cm de diamètre détenant la gouttelette et finalement à soniquer la peau dans 8 mL d'eau glacée à 150 W pendant 10s. La peau a été retirée, la suspension a été centrifugée à 1250 × g pendant 15 min et le surnageant a été réduit à 1 mL par succion sous vide à l'aide d'une pipette. Les conidies ont été colorées au cristal violet et comptées dans un hémacytomètre. L'adhérence des conidies à la peau était de 3,0 %, 14,6 %, 20,8 %, 39,4 %, 57,6 % et 73,1 % après 0, 2, 4, 8, 12 et 24 h d'incubation, respectivement. La sonification était plus efficace que deux autre méthodes de récupération des conidies. Les conidies sur de la peau de fruit exposées à 4 µL d'acétate butylique dans l'espace libre des récipients de verre pendant 4 h à 23°C ont démontré une adhérence de 107 % supérieure à celle de conidies non exposées. La sonification avec une sonde programmable, dont le temps et la puissance étaient réglables, s'est avérée une méthode simple, rapide, sûre et efficace pour la quantification de l'adhérence de conidies de B. cinerea à la peau de pommes.Mots clés : ultrasonification, Botrytis cinerea, adhérence des spores, acétate butylique, écologie fongique, phyllosphère.[Traduit par la Rédaction]
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  • Published since 1954, this monthly journal contains new research in the field of microbiology including applied microbiology and biotechnology; microbial structure and function; fungi and other eucaryotic protists; infection and immunity; microbial ecology; physiology, metabolism and enzymology; and virology, genetics, and molecular biology. It also publishes review articles and notes on an occasional basis, contributed by recognized scientists worldwide.
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