Authors: Shearer, Heather L.; Dennis, David T.

Source: Canadian Journal of Botany, Volume 83, Number 2, February 2005 , pp. 237-241(5)

Publisher: NRC Research Press

Abstract:

A cDNA encoding NADP-dependent malic enzyme was isolated from castor bean (Ricinus communis L.) endosperm. The 2362-bp cDNA encodes a 641 amino acid protein, which is predicted to have a 50 amino acid chloroplast transit peptide. Southern blotting revealed a single copy of the gene. Recombinant protein expression confirmed that the cDNA encodes a NADP-dependent malic enzyme; both Western blotting and enzyme assays detected NADP-dependent malic enzyme. Removal of the transit peptide in the recombinant protein did not affect the pH optimum of the enzyme, but it did result in an increased specific activity.Key words: Ricinus communis, NADP-dependent malic enzyme (NADP-ME), fatty acid biosynthesis, leucoplast, recombinant protein expression, transit peptide.

Les auteurs ont isolé un cADN codant pour l'enzyme malique dépendante du NADP, de l'endosperme du ricin (Ricinus communis L.). Ce cADN de 2362 pb code pour une protéine de 641 acides aminés, dont on prédit qu'elle doit contenir un peptide de transition chloroplastique de 50 acides aminés. Le transfert Southern révèle la présence d'une seule copie du gène. L'expression protéinique recombinante confirme que le cADN code pour l'enzyme malique dépendante du NADP; le transfert Western et l'essai enzymatique détectent tous les deux l'enzyme malique dépendante du NADP. L'enlèvement du peptide de transition de la protéine recombinante n'affecte pas le pH optimum de l'enzyme, mais conduit a une augmentation de l'activité spécifique.Mots clés : Ricinus communis, enzyme malique dépendante du NADP (NADP-ME), biosynthèse des acides gras, leucoplaste, expression de protéine recombinante, peptide de transition.[Traduit par la Rédaction]

Document Type: Research article

Publication date: 2005-02-01

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